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Western检测试剂盒(适用于兔源一抗)图片
产品货号:
GS1586
中文名称:
Western检测试剂盒(适用于兔源一抗)
英文名称:
WB kit for rabbit primary antibody
产品规格:
5T|10T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒适用于宿主为兔的一抗实验系统,具有使用方便、操作简单、检测灵敏度高、背景低和系统稳定性强等多种优点。


  • 操作简便:无需太多准备,拿到试剂盒即能开展试验。
  • 重现性好:实验结果重复性高。
  • 适用于HRP显色系统。



组分5T10T保存
上样缓冲液(5×)500μL1mL室温
脱脂奶粉8g16g
洗涤液原液(20×)30mL60mL
吐温-20500μL1mL
蛋白Marker25μL50μL-20℃
HRP标记的二抗(抗兔)10μL20μL
ECL发光液A10mL20mL2~8℃
ECL发光液B30μL60μL



  • 电泳缓冲液,转膜缓冲液,印迹膜(PVDF膜需要甲醇活化,NC膜),一抗。
  • 电泳仪,转膜仪,摇床。



  • 上样缓冲液(5×)在天气冷的时候很容易有固体析出,请在用之前放在沸水中煮5min,混匀再用。
  • 电泳时间可根据目的蛋白分子量调整。如分子量较小(<20kDa),则溴酚蓝蓝色到达分离胶2/3处即可停止电泳。
    如分子量较大(>100kDa),则溴酚蓝蓝色到底后可继续电泳,以Marker的分子量判断电泳的时间,可等55kDa分子量电泳至分离胶底部。
  • 转膜时注意每一层的叠加不要产生气泡,以免影响转膜效果。转膜的时间根据分子量大小调整。转膜的正负极不能放错,胶在负极,膜在正极。转膜一定在冰浴中进行,如果温度过高,胶容易变形影响转膜效果。



  • 制备样本:使用上样缓冲液(5×)时,加样体积是样本体积的1/4,即总体积的1/5。
  • TBST洗涤液配制:现配现用,先将洗涤液原液(20×)稀释为1×的洗涤液,即19mL蒸馏水/双蒸水/去离子水+1mL洗涤液(20×)。再用10mL 1×的洗涤液+5μL吐温-20
  • 封闭液:现配现用,10mL 1×的TBST+0.5g脱脂奶粉配制成5%的封闭液。
  • 稀释一抗:现配现用,待封闭后洗涤时准备稀释一抗,按照一抗说明书的建议稀释,稀释液即8mL的封闭液+需要稀释的一抗原液(根据8mL的总体积计算一抗原液的体积)。
  • 稀释二抗:现配现用,待一抗孵育后洗涤时准备稀释二抗,即8mL的封闭液+1μL HRP标记的二抗(抗兔)。
  • ECL工作液:现配现用,1mL ECL发光液A+3μL ECL发光液B。



  • 制样:根据上样量和样本浓度计算样本体积,加入适量的上样缓冲液(5×),放入沸水中煮15分钟。
  • 制胶:根据目的蛋白分子量不同配制不同浓度的分离胶(下层胶),以下仅供参考。分离胶凝固后再配制5%的浓缩胶(上层胶)。
    分离胶浓度蛋白相对分子量
    15%<10kDa
    12%10~30kDa
    8%30~70kDa
    6%>70kDa
  • 电泳:加入电泳缓冲液,起始电压80V,待溴酚蓝蓝色电泳至分离胶,约30min,将电压调至120V待溴酚蓝蓝色到达分离胶底部。
  • 转膜:切除浓缩胶,将分离胶放置于转膜缓冲液中,事先准备好与胶大小相同的印迹膜和滤纸。印迹膜如果是PVDF膜需要在甲醇中活化2分钟,再转入转膜缓冲液中浸泡10分钟。滤纸直接放在转膜缓冲液中浸泡10分钟。一般湿转放置顺序:转膜夹黑色面(负极)-海绵垫-滤纸-胶-印迹膜-滤纸-海绵垫-红色面(正极);半干转:负极-滤纸-胶-印迹膜-滤纸-正极。以6╳8cm的膜为例,湿转恒流一般设置150mA每张膜,可根据分子量的大小调整转膜的时间,分子量大的转膜时间长一些,反之,时间短一些。转膜需在冰浴中进行。
  • 封闭:将膜从转膜仪中取出,放入封闭液中,37℃封闭1~2小时。
  • 洗涤:弃去封闭液,加入10mL的TBST,置摇床上洗涤10分钟。
  • 孵育一抗:弃去洗涤液,加入一抗稀释液,摇床上4℃孵育过夜或37℃孵育1~2小时。
  • 洗涤:次日,弃去一抗稀释液,加入10mL的TBST,置摇床上洗涤10分钟,重复2次。
  • 孵育二抗:弃去洗涤液,加入二抗稀释液,摇床上室温或37℃孵育40~60分钟。
  • 洗涤:弃去二抗稀释液,加入10mL的TBST,置摇床上洗涤10分钟,重复2次。
  • ECL曝光:弃去洗涤液,每1cm2膜加入0.05mL的ECL工作液,避光2分钟,直接在机器中观察,或者暗房中经显影液、定影液曝光显色。

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